Support technique

Kit "sandwich"
Kits de sandwich sont entièrement validés et prêt à l’emploi, contenant 96- plaques à puits bande préalablement recouverts d’anticorps de capture pour détecter les antigènes de l’échantillon.
La plaque est recouverte d’un anticorps de capture, puis l’échantillon contenant l’antigène est appliquée sur la plaque et tout antigène présent se lie à l’anticorps de capture; Au cours d’une étape de lavage, la plaque est lavée pour supprimer antigen indépendant; puis détection des anticorps est ajouté et se lie à l’antigène; Puis-enzymatique des anticorps secondaire sont ajouté et se lie à l’anticorps de détection; substrat est ajouté et est converti par l’enzyme pour former détectable. L’absorbance du puits de la plaque est mesurée pour déterminer la présence et la quantité d’antigène. La couleur se développe proportionnellement à la quantité de la quantité d’antigène.

 

 

Kit concurrentiel
Kit concurrentiel dans une analyse concurrentielle d’ELISA, l’antigène de l’échantillon est en concurrence avec un antigène de référence pour la liaison à une quantité spécifique d’anticorps marqués. Les plaques sont recouverts de détection des anticorps. L’anticorps de l’échantillon et biotinylés sont ajoutés aux puits. Au cours d’une étape de lavage, la plaque est lavée pour supprimer antigen indépendant. substrat est ajouté et est converti par l’enzyme pour former détectable. L’absorbance du puits de la plaque est mesurée pour déterminer la présence et la quantité d’antigène. La couleur se développe inversement proportionnellement à la quantité de la quantité d’antigène. Cela signifie l’antigène plus il y a dans l’échantillon, moins l’antigène de référence est détecté et le plus faible du signal.
Certains kits ELISA compétitifs utilisent antigène marqué au lieu d’un anticorps. L’antigène marqué et l’antigène de l’échantillon (sans étiquette) en compétition pour la liaison à l’anticorps primaire. Plus la quantité d’antigène dans l’échantillon, plus le signal dû à plus marqué antigène dans le puits. Il est adapté à la détection d’antigènes petits.

 

 

Kit qualitative
Kit Qualitative des résultats qualitatifs fournissent un simple résultat positif ou négatif pour un échantillon. En ELISA quantitative, la densité optique (OD) de l’échantillon est comparée à une courbe d’étalonnage, qui est typiquement une dilution en série d’une solution de concentration connue de la molécule cible.

Sandwich ELISA Kit MODE OPERATOIRE
Préparer tous les réactifs, solutions étalons et les échantillons en suivant les instructions. Apportez tous les réactifs à température ambiante avant utilisation. L’analyse est réalisée à température ambiante.
Préparer les points standard en double par dilution en série de la solution d’étalon.

Déterminer le nombre de bandes nécessaires pour le dosage. Insérez les bandes dans les cadres d’utilisation. Les bandes inutilisées doivent être conservés à 2-8° C.
Ajouter 50μlstandard à puits standard

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Ajouter 40μl un échantillon à puits et puis ajoutez des anticorps alpha de 10μl anti-TNF au puits d’échantillon, puis ajoutez 50μl streptavidine-HRP au puits d’échantillons et des puits de standards (Contrôle à blanc pas bien ). Bien mélanger. Couvrir la plaque avec un scellant. Incuber 60 minutes à 37° C.

Enlever l’enduit et laver la plaque 5 fois avec le tampon de lavage. Faire tremper les puits au moins 0.35 tampon de lavage ml pour 30 secondes pour 1 minutes pour chaque lavage. Pour le lavage automatique, aspirer tous les puits et laver 5 fois avec le tampon de lavage, puits de trop remplir avec lavage Blot la plaque sur un essuie-tout ou autre matériau absorbant.

Ajouter 50μl substratesolution A dans chaque puits et puis ajoutez la solution de substrat 50μl B dans chaque puits. Incuber plaque recouvert d’un scellant nouveau 10 minutes à 37° C dans l’obscurité.

Ajouter la Solution d’arrêt 50μl dans chaque puits, la couleur bleue change immédiatement en jaune.

Déterminer la densité optique (Valeur de do) valeur de chaque bien immédiatement en utilisant un lecteur de microplaques 450 nmwithin 30 min après l’ajout de la solution d’arrêt.