Apoyo

Kits de ELISA son totalmente validado y listo para su uso, que contienen placas de 96 pocillos de la tira previamente recubiertas con anticuerpo de captura para detectar el antígeno de la muestra.

Principio del Kit de sándwich

En un ensayo de ELISA competitivo, muestra antígeno y el antígeno etiquetado compiten para el atascamiento del anticuerpo de captura. La proteína diana más hay es en la muestra, el antígeno menos etiquetado será capturado y cuanto más débil la señal.

Principio de juego competitivo

 

Procedimiento del ensayo de Kit de ELISA sandwich

Preparar todos los reactivos, soluciones estándar y las muestras como se indica. Poner todos los reactivos a temperatura ambiente antes de usar. El ensayo se realiza a temperatura ambiente.

Preparar duplicados puntos estándar por dilución en serie de la solución estándar.

Determinar el número de tiras requerido para el análisis de. Introducir las tiras en los marcos para el uso. Las tiras no utilizadas deben almacenarse a 2-8° C.

Agregue 50μlstandard al estándar para

.

 

Añadir 40μl pozos de muestra a muestra y luego añadir alpha anticuerpos de anti-TNF de 10μl a pozos de muestra, luego añadir 50μl estreptavidina-HRP a pozos de muestra y estándar pozos (Control no en blanco bien ). Mezclar bien. Cubra la placa con un sellador de. Incubar 60 minutos a 37° C.

 

Retire y deseche el sellador y lave la placa de 5 veces con tampón de lavado. Remoje los pozos con por lo menos 0.35 ml de tampón de lavado para 30 segundos para 1 minutos para cada lavado. Para el lavado automatizado, aspirar todos los pocillos y lavar 5 veces con tampón de lavado, pozos de sobrellenado con lavado secar la placa en toallas de papel u otro material absorbente.

 

Añadir 50μl substratesolution A cada bien y luego agregue 50μl solución substrato B a cada pocillo. Incubar la placa de cubierta con un sellador nuevo para 10 minutos a 37° C en la oscuridad.

 

Añadir 50μl solución de parada a cada pocillo, el color azul se convertirá en amarillo inmediatamente.

 

Determinar la densidad óptica (Valor de OD) juego de cada bien inmediatamente usando un lector de microplacas para 450 nmwithin 30 minutos después de agregar la solución de parada.